Izolacja RNA z krwi zabezpieczonej na kartach FTA – zastosowanie w genetyce klinicznej i sądowej - Skonieczna, Katarzyna; Styczyński, Jan; Krenska, Anna; Wysocki, Mariusz; Jakubowska, Aneta; Grzybowski, Tomasz (Archiwum Medycyny Sądowej i Kryminologii/Archives of Forensic Medicine and Criminology, 2016)
Cel pracy: W ostatnich latach coraz częściej zwraca się uwagę na przydatność analiz RNA w badaniach z zakresu genetyki klinicznej oraz sądowej. Znaczącym problemem podczas prac nad RNA jest jednak jego niska stabilność wynikająca z aktywności RNAz. Tym samym unaocznia się potrzeba doskonalenia metod odpowiedniego zabezpieczania materiału biologicznego do analiz RNA. Rozwiązania technologiczne w postaci kart FTA (Whatman) mogą być użyteczne w kontekście zabezpieczania, transportu i przechowywania materiału biologicznego do badań RNA. Jednakże na ilość i jakość RNA uzyskiwanego z kart FTA mogą mieć wpływ różne warunki jego izolacji. Celem niniejszej pracy była analiza wydajności trzech metod izolacji RNA z krwi obwodowej zabezpieczonej na kartach FTA Classic Card (Whatman) oraz ocena stabilności RNA w plamach krwi zabezpieczonych na takich kartach. Materiał i metody: Badania przeprowadzono na plamach krwi zabezpieczonych na FTA Classic Card (Whatman) od 59 osób. RNA wyizolowano z wykorzystaniem High Pure RNA Isolation Kit (Roche Diagnostics), Universal RNA/miRNA Purification (EURx) oraz TRIzol Reagent (Life Technologies). RNA poddano ocenie ilościowej, a następnie przeprowadzono odwrotną transkrypcję oraz PCR w czasie rzeczywistym. Wyniki : Przeprowadzone badania wskazują, że karty FTA Classic Card (Whatman) stanowią użyteczne podłoże do przechowywania w temperaturze pokojowej plam krwi do badań RNA. Ponadto wykazano, że metoda izolacji z wykorzystaniem odczynnika TRIzol Reagent (Life Technologies) charakteryzuje się najwyższą skutecznością i wydajnością w przypadku próbek przechowywanych do około 2 lat. Wnioski : Przeprowadzone badania wykazały, że karty FTA mogą stanowić użyteczne podłoże do badań RNA w genetyce klinicznej i sądowej.