Archiwum Medycyny Sądowej i Kryminologii

Streszczenie

4/2016 vol. 66
Artykuł oryginalny

Izolacja RNA z krwi zabezpieczonej na kartach FTA – zastosowanie w genetyce klinicznej i sądowej

  1. Department of Forensic Medicine, Ludwik Rydygier Collegium Medicum, Nicolaus Copernicus University in Torun, Bydgoszcz
  2. Chair of Pediatrics, Hematology and Oncology, Ludwik Rydygier Collegium Medicum, Nicolaus Copernicus University in Torun, Bydgoszcz
Arch Med Sąd Kryminol 2016; 66 (4): 244–254
Data publikacji online: 2017/06/08
Pełna treść artykułu
Confronting perimenopausal women’s knowledge of coronary heart disease with their health behaviours. Controversial role of hormone replacement therapy in the protection of coronary heart disease
Cel pracy: W ostatnich latach coraz częściej zwraca się uwagę na przydatność analiz RNA w badaniach z zakresu genetyki klinicznej oraz sądowej. Znaczącym problemem podczas prac nad RNA jest jednak jego niska stabilność wynikająca z aktywności RNAz. Tym samym unaocznia się potrzeba doskonalenia metod odpowiedniego zabezpieczania materiału biologicznego do analiz RNA. Rozwiązania technologiczne w postaci kart FTA (Whatman) mogą być użyteczne w kontekście zabezpieczania, transportu i przechowywania materiału biologicznego do badań RNA. Jednakże na ilość i jakość RNA uzyskiwanego z kart FTA mogą mieć wpływ różne warunki jego izolacji. Celem niniejszej pracy była analiza wydajności trzech metod izolacji RNA z krwi obwodowej zabezpieczonej na kartach FTA Classic Card (Whatman) oraz ocena stabilności RNA w plamach krwi zabezpieczonych na takich kartach.

Materiał i metody: Badania przeprowadzono na plamach krwi zabezpieczonych na FTA Classic Card (Whatman) od 59 osób. RNA wyizolowano z wykorzystaniem High Pure RNA Isolation Kit (Roche Diagnostics), Universal RNA/miRNA Purification (EURx) oraz TRIzol Reagent (Life Technologies). RNA poddano ocenie ilościowej, a następnie przeprowadzono odwrotną transkrypcję oraz PCR w czasie rzeczywistym.

Wyniki: Przeprowadzone badania wskazują, że karty FTA Classic Card (Whatman) stanowią użyteczne podłoże do przechowywania w temperaturze pokojowej plam krwi do badań RNA. Ponadto wykazano, że metoda izolacji z wykorzystaniem odczynnika TRIzol Reagent (Life Technologies) charakteryzuje się najwyższą skutecznością i wydajnością w przypadku próbek przechowywanych do około 2 lat.

Wnioski: Przeprowadzone badania wykazały, że karty FTA mogą stanowić użyteczne podłoże do badań RNA w genetyce klinicznej i sądowej.
Udostępnij